點擊圖片查看大圖合成肽作為目前成本低抗原肽模擬技術已經在免疫制備抗體行業(yè)廣泛被接受，大量被用于模擬制造識別大生物分子的抗體的基本原料,特別是在制備甲基化抗體,磷酸化抗體和糖基化抗體方面,這項技術具有不可比擬的優(yōu)勢.
由于它操作技術簡單,原材料成本低廉,生產周期較短以及人工場地要求簡單的特點,被不少生物界同仁認為是未來五年海外生產向中國制造轉移又一潛力產業(yè).在過去的幾年中，國內已經涌現出數十家進行大規(guī)模定制抗體的生產企業(yè),主要集中在江浙滬一帶.
合成的多肽抗原由于分子較小,免疫到動物體內后很難產生免疫應急反應,因此在免疫前通常要偶聯(lián)一個載體蛋白.常用的載體蛋白有血藍蛋白(KLH),牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA).根據載體蛋白側鏈氨基與多肽抗原上偶聯(lián)位置的不同,我們定義為以下三種:N端氨基偶聯(lián),C端羧基偶聯(lián)和Cys巰基偶聯(lián).
偶連的方式與偶連的活化劑和氨基酸組成有關。
通常有下列三種方法供選擇：
1．EDC:通過C端羧基連接，一般要求序列中無Glu(E)，Asp (D)或一個酰胺化的C端
2．戊二醛通過N端的氨基偶連，要求序列中無Lys (K)或N端沒有被乙?；?/font>
3．MBS:通過Cys的巰基基團與載體上的氨基連接.如果序列中無Cys，可添加Cys或Mpa，好增加在N端。
明皓生物提供以下藕連服務，分別用下列符號代表它們之間的組合：
MB01 BSA-Peptide N terminus
MB02C BSA-Peptide C terminus
MB02Cys BSA-Peptide Cys
MK01 KLH-Peptide N terminus
MK02C KLH-Peptide C terminus
MK02Cys KLH-Peptide Cys
MO11 OVA-Peptide N terminus
MO12C OVA-Peptide C terminus
MO13Cys OVA-Peptide Cys
偶聯(lián)好的載體復合物經過透析,再加入佐劑和進行乳化,就可以進行免疫了.經過一免,二免和增強免疫后,6-8周左右可以看到一個具有一般效價的制備多抗.這時候再通過取血,離心取上清的方法得到抗性血清.有條件的單位還通常會用標準蛋白Protein A/G進行抗體純化,為了運輸和儲存需要有時會進行凍干處理.也有根據客戶的需要用免疫的抗原掛到親和層析柱上對抗體進行純化,得到專一性更高的多抗體.
單抗的制備要稍微復雜一些,時間跨度會更長,一個項目結束下來要半年左右的時間.
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